生物顯微鏡微生物污染的檢測

污染的潛在來源是多方面的，如來自用具、室內(nèi)空氣、工作臺面、組織樣品v溶液，以及操作過程等。因此必須盡量小心地去避免它。然而，即使是zui的實驗室，也準免不發(fā)生污染。因此。要經(jīng)常進行檢測，爭取盡早發(fā)現(xiàn)，及時排除，防止擴大污染。

建議采用如下步驟檢測：

（1）用肉眼或生物顯微鏡檢查各步驟的污染。每2—3個月核查一次支原體（如果是原代培養(yǎng)，則2—3周核查一次）。

（2）如懷疑有污染，但仍不明顯，又沒有證明，除懷疑的培養(yǎng)物和吸管外，先將工作罩子和工作臺面清潔消毒。然后，待所有的培養(yǎng)工作操作步驟結(jié)束后，取懷疑培養(yǎng)物樣品．摘在載敢片上，在生物顯微鏡下仔細檢查，用位相差顯微鏡進行檢查。如證明有污染，將吸管丟棄，用70%酒精按沈罩子和工作臺面，30分鐘后再使用。

（3）將污染性質(zhì)記錄在登記卡上。

（4）如果是新的污染，又是局部污染，沒有擴散，則將污染培養(yǎng)物、用來接種污染培養(yǎng)物的培養(yǎng)瓶和其他用于此培養(yǎng)的胰蛋白酶瓶子等丟棄到消毒劑中去，在組織培養(yǎng)區(qū)外的毒氣罩內(nèi)操作。

（5）如果是新的污染，而且是散播的，即至少在兩個不同培養(yǎng)物中均發(fā)現(xiàn)有的，應把所有的培養(yǎng)液、母液以及胰蛋白酶等均丟棄。

（6）如果類似污染重復出現(xiàn)．則檢測母核是否污染。可采用的檢測法：1）單獨濕育或在營養(yǎng)肉湯中溫育；2）鋪在營養(yǎng)瓊脂板（Difco）上；3）假如上述兩個方法均末檢測出來，但仍有懷疑時，則取100m1，通過0.2μm濾膜過濾，然后將濾膜鋪在營養(yǎng)瓊脂上溫育。

（7）如果污染不但廣泛散播，又是多品種的，而且重復再現(xiàn)，則需要檢查消毒步驟，即烘箱和蒸氣消毒鍋的溫度、消毒時間、包裝和貯存方面是否有問題．以及房間消毒和超凈

工作臺的垂直層流的過濾器是否失效。

（8）不要企圖清除污染物的污染，除非它們是*的培養(yǎng)物。清除污染可以：1）用

合有比正常濃度高的抗生素的B5s清洗培養(yǎng)物，清洗5次；2）加抗生素到培養(yǎng)液中，放置48小時。如果可能，可檢測污染物對四一種抗生累比較敏感53）除去抗生素。在不加抗生素情況下培養(yǎng)2周，核查污染是否已被清除。

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